Разворот на подъеме: Разрешено ли Вам выполнить разворот при движении на подъеме

Содержание

«Слетают через 100 метров». Что говорят те, кто сдавал на права по-новому :: Autonews

С 1 апреля в России действуют новые правила сдачи экзамена на права. Площадки как отдельной части испытания больше нет: все задания ученики должны выполнять в городе, то есть в условиях постоянного потока других автомобилей. Такая схема должна отучить автошколы от механического заучивания упражнений и помочь водителям лучше ориентироваться в незнакомом пространстве.

Экзамен проводят на специальном маршруте, который подразумевает возможность выполнения нескольких обязательных упражнений. На выполнение экзамена дается около 30 минут. Кандидаты в водители уже вовсю делятся первыми впечатлениями от экзамена по новым правилам в соцсетях. Autonews.ru собрал несколько историй из разных городов России.

Дмитрий Созонов: «Москва, ЮЗАО, после теории сразу в город, площадки нет.

Перечень улиц пока не поменялся. Где ездили, там и продолжают. Претенденты вылетают через 100 метров. Уж не знаю, какие им задания дают. Но сейчас действительно страшно. Наблюдал, как вчера экзаменационная машина парковалась между автомобилями в городе. После неудачной попытки инспектор вышел и в один вдох выкурил сигарету».

Вероника Дуболазова: «Проходит экзамен сначала на площадке. Эстакада (остановка только на уклоне, дальше без остановки), затем параллельная парковка и заезд в бокс (теперь без линий разметки и как повезет, левым бортом или правым заезд), все это обязательно с ремнем и поворотниками. Если все ок, то сразу оттуда в город и обязательное выполнение всех остальных упражнений. Сегодня из примерно 300 желающих, выехало с площадки 5 человек. Сдали дальше или нет, неизвестно. Теперь если косяк на площадке или в городе, то пересдача всего комплекса, а не по отдельности».

Игорь Нилов: «Тольятти: на автодроме сдают горку, въезд в гараж, параллельную парковку. Остальное — город. Но на автодроме инспекторы не могут до конца определиться, когда и где включать указатели поворота. Одни требуют включать везде при выполнении упражнений. Другие требуют включать только при движении между упражнениями».

Фото: Autonews.ru

Яна Кобылинская: «Город Дзержинск, Нижегородская область. Сдавали по новому регламенту. Начали движение от здания ГИБДД. Нас выгнали на улицу, ждали инспекторов 1,5 часа. Сразу поехали по городу, на начальном этапе уже отсеялось человек 5. Нужно было делать перестроение с опережением, обгон, разворот в ограниченном пространстве, разворот с прилегающей территории, ехать со скоростью 56-59 км/ч.

Самые частые задания: поворот налево, направо, проезд перекрестков.

Кто сдал город, едут на площадку автодрома, там «горка», «парковка» и «гараж». Теперь на горке остановка не только на подъеме, но и на спуске. Остановка по требованию инспектора. Сказали нам это, конечно же, на самом экзамене. Включение поворотников на автодроме при любом движении. На упражнения дается две попытки, по усмотрению инспектора. Одной ученице не дали возможности заехать второй раз на парковку. Все в недоумении от новых правил, и инспектора, и школы. Инспекторам тупо выдали бумажки, и они по ним гоняют учеников, ничего сказать не могут, как выше дали указания, так и делают. В целом сдать реально, маршруты типичные. Многие завалились на развороте в условиях города. Как нам сегодня сказали, мы подопытные крысы, пока на нас новую систему испытывают. В мае топаю на пересдачу».

Коля Федоров: «Сдавал сегодня в Москве, в Северном Бутово. Как я понял, маршруты остались примерно такими же, то есть как угодно по ограниченному району. Но только в городе дополнительно к обычным заданиям добавляется параллельная парковка, гараж (могут попросить заехать во двор, там искать место), разворот в ограниченном пространстве. Вот на нем я, как и трое передо мной, завалились. Чтобы на узкой улице без помех попутным и встречным это выполнить, надо это тренировать заранее, а мы только на площадке делали такой разворот в три приема. Увы, из тех, у кого я узнавал на месте (человек 7), все не сдали».

Фото: Щеголева Ольга / Фотобанк Лори

Андрей Миронов: «Не сдал. Питер. Приехали с автошколой в ГИБДД в 7:45. В аудиторию для сдачи теории зашли в 9:00. Большинство успешно сдали и ожидали практической части. Около 11:30 начался инструктаж. У нас было определено начинать экзамен с упражнений на площадке. Первое упражнение — эстакада, заезжаем на подъем и фиксируем машину, далее проезжаем вперед и фиксируем на спуске. Почти сразу идем на разворот и попадаем на параллельную парковку. Я не сдал, причина была — пересечение боковой линии разметки. Сейчас площадка короче и конусов поменьше. Из тех, с кем я ездил (20 человек), никто не сдал».

Юлия Домбровская: «Питер, не сдала. Сдавала с автошколой, приехали к 9, в 10:50 сдали теорию, за руль села в 19 часов! 8 часов ожидания. Инструкторы автошколы понимают еще меньше нашего, гнали, что повторное включение заднего хода на площадке — это три балла, я уже просто не слушала. Начинали с площадки — эстакада, бокс, парковка. Про разворот в три приема сказали, что он будет в городе. Но я и девочка передо мной делали его на площадке, в итоге 4 упражнения. Бокс очень узкий. Поворотник надо включать, даже если трогаешься на площадке. В ожидании 8 часов есть плюс — сил не остается на переживание. Я ехала и было уже все равно. Сдала у нас одна девушка, 15 человек не сдали».

Владимир Рудачихин: «Вопросов по новому регламенту, больше чем ответов. Составлял его человек, который вообще не в теме. Начиная вопросом об ответственности, заканчивая некоторыми обязательными элементами. В маленьких городах зачастую водителям невозможно без нарушения выполнить обгон или опережение, а это обязательный элемент всех категорий. А на вопрос, кто является владельцем ТС во время экзамена, у нас в областном ГИБДД ответить не могут».

Татьяна Тарасова: «Наконец-то на 6-й раз я сдала! Делюсь радостью. В экзаменационном листе теперь не пишут марку и номер машины, ко мне приехал Solaris, до меня парень сдавал на Ford. Начала трогаться и заглохла, стартовать, видимо, на этом автомобиле лучше с газом, за это получила отметку в листе. Припарковалась почти там же, где начала. Все! Фамилию инспектора не знаю, но он был очень приятный, немного подсказывал и напоминал команды. У меня это была последняя попытка перед истечением срока действия теории, потом бы все заново. Площадку сдала следом за теорией еще в ноябре со второго раза. Ну и как видите, элементы площадки у меня не спрашивали вообще».

Фото: Евгений Епанчинцев / ТАСС

Анна Давиденко: «Сегодня сдала! Вторая попытка. Первая попытка была с автошколой в феврале, сдала теорию и площадку. Город завалила. Открепилась от автошколы. Два месяца ожидания своей записи. Сразу в экзаменационный лист инспектор поставил галочки, что элементы площадки выполнены, это еще до начала экзамена. На маршруте даже заднюю передачу не пришлось включать, чему я несказанно рада. Машина была заведена, фары включены, когда пристегивалась, инспектор тоже пристегнулся, просить не пришлось. Катались полчаса».

Сергей Зимацкий: «Вести с полей, Санкт-Петербург. Народ повально валится на площадке из-за отсутствия адаптации к новым условиям. Везде нужен поворотник. Будьте внимательны! На новой площадке разметка больше ничего не значит, просто расставлены элементы (эстакада, разворот в три приема, гараж, параллельная парковка)».

Вагон Арбузов: «Воронеж, на 12 апреля всего 4 человека сдали на город-миллионник, четыре машины пострадало. ГИБДД вынуждены сейчас закупать собственные автомобили для экзаменов, к этому все сделали. По регламенту положено дать 20 минут на ознакомление с автомобилем, но нигде этого нет. Сажают за руль — сразу сдавай. И уровень подготовки в автошколах оставляет желать лучшего. Когда записывался в автошколу, в описании было указано 56 часов практики, барышня-администратор сказала мне, что практики 28 часов, по факту было 14 практических занятий по одному часу. Первое занятие было знакомство с автомобилем. Из школы вышел с водительской практикой 13 часов, из них половина на автодроме».

Система подготовки водительских кадров

Будущим водителям

После того, как вы закончили обучение ПДД, Вас допускают к экзаменам в автошколе.

С 1 сентября 2006 года произошли изменения, и сдача экзамена по вождению проходит в 2 этапа. Первый этап представляет собой экзамен на специальной площадке. Второй этап — экзамен в городе. Управление автомобилем на городских магистралях в интенсивном транспортном потоке сильно отличается от вождения на площадке. Ко второму этапу допускаются ученики, успешно прошедшие первый.

Зарубежная и отечественная экзаменационная практика свидетельствует о том, что наиболее объективным и безопасным методом оценки практических навыков управления транспортным средством является проведение экзамена на специальной закрытой от движения площадке или автодроме. Именно в этих условиях представляется возможным реализовать основную цель первого этапа практического экзамена: проверку у кандидатов в водители навыков управления транспортным средством конкретной категории и определение возможности допуска к экзамену в условиях реального дорожного движения.

Экзамен на площадке представляет собой выполнение трех элементов, из списка:

Упражнение	Прикладное значение	Проверяемые навыки и действия
Остановка и трогание на подъеме (эстакаде, горке)	Остановка в заданном месте и безопасное трогание с места на участке проезжей части, имеющей продольный уклон.	Трогание с места в сложных условиях, координация управляющих действий педалями.
Параллельная парковка задним ходом	Постановка транспортного средства на стоянку параллельно краю проезжей части между припаркованными транспортными средствами, расстояние между которыми не позволяет сделать это при движении передним ходом.	Маневрирование передним и задним ходом в ограниченном пространстве, построение оптимальной траектории маневра, «чувство» статического и динамического габаритов транспортного средства.
Змейка	Объезд ряда расположенных на проезжей части препятствий при ограниченной ее ширине.	Маневрирование передним ходом, построение оптимальной траектории маневра, «чувство» статического и динамического габаритов транспортного средства, а также пользование рулевым колесом.
Разворот в три приема	Разворот на проезжей части ограниченной ширины с минимальным количеством включений передачи заднего хода.	Маневрирование передним и задним ходом, построение оптимальной траектории маневра, «чувство» статического габарита транспортного средства.
Въезд в бокс	Постановка транспортного средства на стоянку перпендикулярно краю проезжей части между припаркованными транспортными средствами, въезд в гараж.	Маневрирование передним и задним ходом, «чувство» статического габарита транспортного средства, построение оптимальной траектории маневра.

Вариант, по которому будет приводиться экзамен, выбирается экзаменатором и объявляется кандидатам в водители непосредственно перед началом практического экзамена.

Для кандидатов в водители ТС категории «В», «С» и «D» 3 упражнения:

a. вариант 1:
- упражнение № 4 — «остановка и трогание на подъеме»;
- упражнение № 5 — «параллельная парковка задним ходом»;
- упражнение №г 6 — «змейка»;
b. вариант 2:
- упражнение № 4 — «остановка и трогание на подъеме»;
- упражнение № 5 — «параллельная парковка задним ходом»;
- упражнение № 7 — «разворот»;
c. вариант 3:
- упражнение № 4 — «остановка и трогание на подъеме»;
- упражнение № 6 — «змейка»;
- упражнение № 8 — «въезд в бокс».

Для адаптации к экзаменационному ТС (в случае, если подготовка проводилась на другом ТС) кандидату в водители предоставляется право осуществить пробную поездку в пределах площадки продолжительностью не более 2 мин. При этом в экзаменационном ТС должен присутствовать его собственник (за исключением ТС категории «А»). Ошибки, допущенные в ходе пробной поездки, не протоколируются и не влияют на результат экзамена.

После выполнения пробной поездки кандидат в водители может заявить о своей неготовности и отказаться от сдачи экзамена. В этом случае ее выполнение не засчитывается в качестве попытки сдачи практического экзамена.

После успешной сдачи первого этапа кандидат в водители допускается ко второму.

подъем Сибири и Дальнего Востока — национальный приоритет на весь XXI век

Президент РФ Владимир Путин поставил правительству задачу до 1 июля 2014 года определить, в каких регионах Восточной Сибири и Дальнего Востока будет создана сеть территорий опережающего развития, с особыми условиями организации несырьевых производств, ориентированных, в том числе, и на экспорт.

«Ресурсы и государства, и частного бизнеса должны идти на развитие, на достижение стратегических целей. Например, таких, как подъем Сибири и Дальнего Востока. Это наш национальный приоритет на весь XXI век.

Задачи, которые предстоит решить, беспрецедентны по масштабу, а значит и наши шаги должны быть нестандартными», — сказал Путин, обращаясь с ежегодным Посланием Федеральному Собранию. Он напомнил об уже принятом решении по льготной ставке налога на прибыль и ряду других налогов для новых инвестпроектов на Дальнем Востоке и предложил «распространить этот режим на всю Восточную Сибирь, включая Красноярский край и Республику Хакасия».

«Для новых предприятий, размещенных в таких зонах, должны быть предусмотрены пятилетние каникулы по налогам на прибыль, НДПИ, за исключением нефти и газа — это доходная отрасль, налогам на землю, имущество, а также, что очень важно для технологических производств, льготной ставкой страховых взносов», — сказал президент РФ.

«Здесь будут созданы условия ведения бизнеса конкурентные, с ключевыми деловыми центрами, процедуры разрешения на строительство, подключение к электросетям, прохождения таможни. А чтобы решить вопрос инфраструктуры таких территорий, активно задействуем возможности Фонда развития Дальнего Востока. До 1 июля 2014 года необходимо определить, где конкретно будут организованы такие территории, а также выпустить все правовые нормативные акты, необходимые для их работы. Прошу председателя правительства взять эту работу под личный контроль», — распорядился российский лидер.

«С учетом опыта и практики таких территорий, полученного эффекта, примем решение об их будущем развитии. Мы продолжим и те проекты, которые сегодня уже реализованы. На острове Русский построен новый университет. Он должен наладить глубокую научную экспертизу программ развития Дальнего Востока, обеспечить потребность региона в кадрах, прежде всего по таким направлениям, как космос, биотехнологии, робототехника, дизайн, инжиниринг, океанология и использование морских ресурсов. Уверен, что разворот России к Тихому океану, динамичное развитие всех наших восточных территорий не только откроет нам новые возможности в экономике, но и даст дополнительные инструменты для проведения активной внешней политики», — указал российский лидер.

ИТАР-ТАСС

Автошкола ВОА Иркутск — Вождение автомобиля

Вождение автомобиля

Практическое вождение проходит параллельно с теорией, по индивидуальному графику, согласованному с мастером производственного обучения.

Место встречи учеников с инструкторами

Для удобства и безопасности наших учеников место встречи с инструкторами находится возле бизнес-центра Зеон. Здесь, в непосредственной близости от остановок общественного транспорта находится удобная, практически постоянно свободная парковка, откуда Вы начинаете занятие с инструктором. По окончании занятий инструктор доставит Вас в это же место или, например, на ближайшую остановку общественного транспорта. Показать место встречи на Карте

Практический курс включает два этапа: вождение на закрытой площадке и вождение в городе.

1. Вождение на закрытой площадке. Сюда включаются пять основных упражнений:

УПРАЖНЕНИЕ №4. «Остановка и начало движения на подъеме»

Кандидат в водители: останавливает транспортное средство перед линией «Стоп-1», не пересекая проекцией переднего габарита транспортного средства, таким образом, чтобы все колеса находились на участке подъема; фиксирует транспортное средство в неподвижном состоянии; продолжает движение в прямом направлении, не допуская отката назад; останавливается перед линией «Стоп-2» не более 1 м включает нейтральную передачу (механика) и фиксирует транспортное средство в неподвижном состоянии; выезжает пересекая линию «Стоп-2»

УПРАЖНЕНИЕ №5. «Маневрирование в ограниченном пространстве»

Упражнение «Маневрирование в ограниченном пространстве» состоит из 3 элементов. На площадке экзаменатор на свое усмотрение назначит Вам к выполнению два из трех нижеперечисленных:

«Повороты на 90 градусов»

«Разворот в ограниченном пространстве»

«Змейка»

Для выполнения «поворотов на 90 градусов» кандидату в водители необходимо выполнить поочередные повороты автомобиля влево и вправо по заданной траектории на автодроме:

Разворот в ограниченном пространстве

По-другому этот элемент называют «Разворот в три приема». Считается простым элементом площадки. Выполняется этот элемент в три действия: поворот налево, движение задним ходом с выкручиванием руля вправо, движение вперед с постановкой автомобиля в положение противоположное исходному.

Змейка

Описание у данного элемента довольно простое, но выполнить его не так просто: кандидат в водители поочередно совершает левый и правый повороты по заданной траектории.

При выполнении элемента «змейка» кандидату в водители запрещено пересекать сплошные линии горизонтальной разметки, обозначающие границы элемента «змейка». При этом запрещено сбивать конусы, которые обозначают траекторию движения автомобиля. Скорость выполнения элемента должна быть пониженной.

В конце выполнения «змейки» включите нейтральную передачу и остановитесь. По 5 баллов за ошибку можно получить, если курсант отклонился от заданной траектории движения или сбил элементы разметочного оборудования. По 5 баллов дадут, если пересек линию горизонтальной разметки площадки или пересек линию «СТОП» (по проекции переднего габарита ТС).

По 3 балла дается, если не включил нейтральную передачу после остановки, не включил стояночный тормоз после остановки в зоне стоянки. Нельзя, чтобы при выполнении какого-либо упражнения заглох двигатель — за это снимут по 1 баллу. Подробнее про штрафные баллы на экзамене в ГИБДД

УПРАЖНЕНИЕ №6. «Движение и маневрирование задним ходом, въезд в бокс задним ходом»

Следующее упражнение дает понять насколько хорошо водитель освоил навыки движения задним ходом. В народе его называют просто «Въезд в бокс».

Кандидат в водители должен, въехав в зону выполнения упражнения, маневрировать задним ходом для постановки транспортного средства в имитируемый бокс так, чтобы проекция переднего габарита транспортного средства пересекла контрольную линию упражнения.

Заехав в бокс, необходимо включить нейтральную передачу и зафиксировать транспортное средство в неподвижном состоянии стояночным тормозом. Затем выполняется выезд из бокса и пересекается линия окончания выполнения упражнения.

Элемент въезд в бокс осуществляется на автомобиле из исходного положения, его можно делать как с правой, так и с левой стороны от условного бокса. Въехать в бокс можно только с одноразовым включением передачи заднего хода. Грубыми ошибками — по 5 баллов за каждую — являются: сбой элементов разметочного оборудования, заезд за линию горизонтальной разметки площадки, пересечение линии «СТОП» (по переднему габариту ТС).

По 3 балла за ошибку можно получить, если не включен стояночный тормоз после остановки перед линией, не въехал в бокс при одноразовом включении передачи заднего хода, не включил нейтральную передачу после остановки при работающем двигателе.

УПРАЖНЕНИЕ №7. «Парковка транспортного средства и выезд с парковочного места, парковка для погрузки (разгрузки) на погрузочной эстакаде (платформе), остановка для безопасной посадки или высадки пассажиров

Для осуществления упражнения «Параллельная парковка» необходимо установить автомобиль на место парковки с применением движения задним ходом. Левый край автомобиля не должен пересекать контрольную линию выполнения упражнения. После постановки автомобиля на «парковку» необходимо включить нейтральную передачу и зафиксировать ТС в неподвижном состоянии. Лишь после фиксации автомобиля можно выезжать с места парковки.

2. Вождение в городе: необходимо освоить разворот, левый поворот на регулируемом и нерегулируемом перекрестке, движение и поворот в узких переулках, выезд с прилегающей территории и т.д.

Автомобиль, которым управляет ученик, оборудован дополнительными педалями, и все Ваши неверные действия опытный инструктор быстро нейтрализует.

PES 2018/Pro Evolution Soccer 2018: руководство

Почитайте о других улучшенных инструментах управления. Они могут показаться сложными, но владение ими добавит измерений в вашу игру! Секция, отмеченная зеленым цветом, используется совместно (как при атаке, так и при защите).

Cancel Passing / Shooting

КОНТРОЛИРУЕМЫЙ УДАР

ЛОЖНЫЙ ПРИЕМ МЯЧА

УДАР-НАВЕС

Нажмите кнопки и , чтобы перекинуть мяч через вратаря.

УДАР-НАВЕС	+

БЫСТРАЯ ОСТАНОВКА И РАЗВОРОТ

Отпустите и нажмите , чтобы смотреть на ворота. Делайте это во время дриблинга, если вы хотите сделать внезапную остановку, при этом продолжая смотреть на ворота соперника.

Быстрая остановка и разворот

ПОДРАБОТКА МЯЧА

Стоя на месте, нажмите и наклоните в нужном направлении, чтобы касанием подработать мяч под удар или пас. Это улучшит точность последующего удара или паса.

ПОДРАБОТКА МЯЧА	+ * стоя на месте

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ СМЕНА КУРСОРА

Нажмите , чтобы двигать курсор и автоматически управлять игроком, ближайшим к мячу. Нажмите в направлении конкретного игрока, чтобы двигать его вручную.

СМЕНА КУРСОРА
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ СМЕНА КУРСОРА

Как изменять ваши удары

Иногда удары в сторону ворот, выполняемые игроками, обладающими способностью «Удар подъемом», идут по виляющей, непредсказуемой траектории, или же удары заканчиваются резким падением в конце. Пробуйте нанести удар во время бега в сторону ворот при низком уровне прессинга на вас.

Если вынесенный мяч (например, с углового) летит в вашу сторону, попробуйте нанести по нему удар, пока он находится в падении. Это позволит вам сильно закрутить мяч вверх, придавая ему резкое падающее движение.

При попытке подать поперечную передачу головой, заранее нажмите на кнопку удара, чтобы с силой направить мяч головой в землю.

Технические характеристики Volkswagen Amarok

Тип двигателя	Дизельный	Дизельный	Дизельный	Дизельный	Дизельный
Рабочий объем (см³)	1968	1968	1968	2967	2967
Максимальная мощность (л.с.)	140 при 3500 об/мин	180 при 4000 об/мин	180 при 4000 об/мин	224 при 3000-4500об/мин, overboost до 245 в течение 10с	258 при 3250-4000 об/мин, overboost до 272 в течение 10с
Максимальный крутящий момент (Нм)	340 при 1600-2 250 об/мин	400 при 1500-2200 об/мин	420 при 1500-2 200 об/мин	500 при 1400-2750 об/мин	580 при 1400-3000 об/мин
Тип топлива	Дизельное, не ниже K5	Дизельное, не ниже K5	Дизельное, не ниже K5	Дизельное, не ниже K5	Дизельное, не ниже K5
Коробка передач	Руч., механическая, 6-ступенчатая	Руч., механическая, 6-ступенчатая	Авт., гидромеханическая, 8-ступенчатая	Авт., гидромеханическая, 8-ступенчатая	Авт., гидромеханическая, 8-ступенчатая
Привод	Полный, подключаемый с понижающим рядом	Полный, подключаемый с понижающим рядом	Полный, постоянный	Полный, постоянный	Полный, постоянный
Расход топлива в городе/по трассе/в среднем (л/100км)	9.6-9.1 / 6.8-6.3 / 7.8-7.3	9.8-8.7 / 7.3-6.8 / 8.0-7.5	10.1-9.8 / 7.6-7.0 / 8.5-8.0	8.6 / 7.3 / 7.8
Объём топливного бака (л)	80	80	80	80	80
Выброс CO₂ в среднем (г/км)	205-192	211-197	224-211	204-203
Ускорение 0 — 100 км/ч (c)	13.5-13.1	11.0-10.6	11.3-10.9	8.0-7.9	7.6-7.3
Максимальная скорость (км/ч)	167-162	183-178	179-174	193-191	207-199
Экологический стандарт	Euro 4/5	Euro 4/5	Euro 4/5	Euro 5	Euro 5
Грузоподъёмность (с подвеской Heavy Duty) (кг)	1052-606	1041-595	1041-595	985-549	792-545
Грузоподъёмность (с подвеской Comfort) (кг)	849-525	838-545	838-545	842-545	935-551
Макс. нагрузка на ось пер./зад. (с подвеской Heavy Duty) (кг)	1375 / 1860	1385 / 1860	1415 / 1860	1445 / 1860	1445 / 1860
Макс. нагрузка на ось пер./зад. (с подвеской Comfort) (кг)	1375 / 1620	1385 / 1620	1415 / 1620	1445 / 1630	1445 / 1630
Макс. масса прицепа при подъёме 12% с/без тормозов (с подвеской Heavy Duty) (кг)	3000 / 750	3000 / 750	3200 / 750	3300 / 750	3300 / 750
Макс. масса прицепа при подъёме 12% с/без тормозов, кг (с подвеской Comfort) (кг)	3000 / 750	3000 / 750	3200 / 750	3300 / 750	3300 / 750
Максимальная масса автопоезда (кг)	5550	5550	5950	6000	6000

АНАЛИЗ: Уход глав ЦБ и Минфина Турции может означать разворот в экономической политике

СТАМБУЛ (Рейтер) — Неожиданный уход сразу двух высокопоставленных турецких чиновников в экономической сфере на выходных подготавливает плацдарм для повышения процентной ставки и других мер, направленных на замедление рекордного падения лиры, полагают аналитики.

Turkish Treasury and Finance Minister Berat Albayrak attends a news conference in Istanbul, Turkey, April 10, 2019. REUTERS/Umit Bektas

В воскресенье о своей отставке с поста министра финансов по состоянию здоровья сообщил Берат Албайрак, зять президента Турции Тайипа Эрдогана. Он проработал на этой должности два года.

В субботу Эрдоган сменил главу центробанка — вместо Мурата Уйсала ЦБ Турции возглавит бывший министр финансов Наджи Агбал.

Подъем курса лиры в понедельник достигал рекордных за несколько месяцев 4%, валюта торговалась на уровне 8,2450 за доллар к 12:20 МСК. При этом еще в пятницу лира обновила рекордный минимум, потеряв 30% с начала года.

Падение лиры вызвано опасениями истощения валютных резервов центробанка, дорогостоящих интервенций правительства на валютном рынке, отрицательных реальных ставок и рисков санкций со стороны стран Запада.

Эрдоган и Албайрак публично призывали к снижению ставок, что еще больше усилило опасения по поводу независимости центробанка страны. Однако в прошлом месяце ЦБ сохранил ключевую ставку на уровне 10,25%.

В понедельник новый глава турецкого центробанка сказал, что регулятор будет нацелен на снижение высокой инфляции и будет решительно использовать все имеющиеся у него инструменты.

“У Агбала есть власть и близость (отношений), чтобы пойти и рассказать о ситуации непосредственно президенту, — сказал высокопоставленный чиновник партии Эрдогана. — Это трудный пост, но необходимо предпринять шаги, чтобы остановить стремительный рост обменного курса”.

Аналитики Goldman Sachs и TD Bank ожидают, что Агбал, близкий союзник Эрдогана, поднимет ключевую процентную ставку как минимум на 600 базисных пунктов, причем он может сделать это уже на заседании 19 ноября.

Между тем глава глобального отдела валютной стратегии в Brown Brothers Harriman Вин Тин отметил, что “политические риски в Турции подскочили за эти выходные” после отставки Албайрака.

“В качестве причины (для ухода) указано здоровье, но очевидно, что это нечто большее, чем кажется на первый взгляд”, — сказал аналитик.

Турция, крупнейшая экономика Ближнего Востока, столкнулась с двумя резкими рецессиями в последние два года. Сейчас экономика страны восстанавливается после вызванного коронавирусом спада, однако инфляция упрямо держится около 12%, при этом уровень безработицы также остается высоким, особенно среди молодежи.

Джонатан Спайсер, Орхан Коскун и Невзат Девраноглу. Перевел Владимир Садыков. Редактор Марина Боброва

школ разворачиваются на 180 градусов и число случаев коронавируса разрушает надежды на облегчение новогодних праздников | Коронавирус

Надежды правительства на ослабление пандемии Covid в новом году рушатся, и министры вынуждены сделать разворот в связи с открытием начальных школ и больниц по всей стране, которые борются с растущим числом тяжело больных пациентов.

По мере обострения кризиса больница Nightingale, построенная в лондонском центре ExCeL, как ожидается, впервые с весны примет пациентов с Covid на следующей неделе.

Больницы в восточной части Лондона испытывают чрезвычайное давление, в то время как в Эссексе и Бакингемшире объявили о серьезных инцидентах, что позволяет местным руководителям заручиться поддержкой правительства. Другие крупные больницы по всей стране готовятся к худшему.

Предупреждения об углублении кризиса поступили следующим образом:

Число новых случаев заболевания превысило 50 000 четвертый день подряд, около 24 000 человек были госпитализированы и зарегистрированы 613 смертей, одним из которых был восьмилетний ребенок с заболеванием. состояние здоровья.
Ученые подтвердили, что новый вариант коронавируса увеличил количество случаев заболевания за ноябрь в три раза.
Правительство поддалось восстанию советов, руководителей школ и профсоюзов преподавателей из-за его «произвольных» действий по закрытию начальных школ в одних районах, а в других — нет. Теперь это означает, что все праймериз в Лондоне будут закрыты, за исключением уязвимых детей и ключевых работников, по крайней мере, до 18 января. Разворот может побудить родителей в других районах потребовать закрытия своих школ.

Крупные столичные больницы, такие как Royal London, Barts и UCLH, переводят палаты в отделения интенсивной терапии, чтобы принимать больше пациентов с Covid. В электронном письме персоналу Королевской лондонской больницы говорилось, что он теперь находится в «режиме медицины катастроф».

Трейси Флетчер, исполнительный директор больницы Хомертон в Хакни, разместила в Твиттере график их госпитализаций по Covid в канун Нового года, показывающий большое количество пациентов в палатах и отделениях интенсивной терапии в каждой возрастной группе, от 27 до 25 лет. От -44 до 41 лет, от 65 до 74 лет и от 17 до 80 лет.«Поступившие пациенты = тяжелобольные. Сегодня в @NHSHomerton никто не тусуется. Пожалуйста, соблюдайте все ограничения Covid », — написала она в Твиттере.

В Эссексе был объявлен серьезный инцидент, когда пациенты были доставлены по воздуху из переполненной больницы в Саутенде в Кембридж.

Essex Resilience Forum (ERF), состоящий из членов NHS, служб экстренной помощи и местных властей, заявил на этой неделе, что количество пациентов в Эссексе, получающих лечение от коронавируса, теперь увеличилось до уровней, превышающих те, которые наблюдались на пике первая волна.

Ожидалось, что в ближайшие дни это число еще больше увеличится, и особенно много случаев было в среднем и южном Эссексе.

Лиза Уорд, ведущая респираторная медсестра больницы Саутенда, вчера вечером написала в Твиттере, что в больнице «очень плохо». Уорд умоляла общественность оставаться дома после того, как она закончила свою смену.

Депутат от консерваторов сэр Бернард Дженкин запросил помощь вооруженных сил Эссексу в палате общин, в том числе для развертывания вакцины и тестирования в школах.

Бакингемшир также объявил о крупном инциденте на этой неделе. Глава окружного совета Мартин Тетт сказал: «Наш показатель среди людей старше 60 лет в настоящее время ставит наши медицинские и социальные услуги под очень серьезное давление — показатели в этой возрастной группе выросли более чем на 60%, и мы думаем, что это будет продолжаться, по крайней мере, в течение следующих двух недель ».

Хотя Лондон сильно пострадал из-за большого всплеска случаев, связанных с вариантной формой вируса, которая первой взлетела в Эссексе и Кенте и перешла в госпитализацию, по данным Национальной службы здравоохранения, остальная часть страны не сильно отстает. Конфедерация, представляющая организации NHS.

Дэнни Мортимер, генеральный директор конфедерации, сказал, что больницы испытывают трудности. «Можно справиться, но, справляясь, они идут на компромиссы, на которые обычно не идут. Им все чаще приходится отменять, переписывать и прерывать лечение пациентов, у которых нет Covid, им приходится обслуживать помещения совсем не так, как они обычно, поскольку они перепрофилируют театры в отделения интенсивной терапии или зоны высокой зависимости.

«Они берут тех же сотрудников и распределяют их более тонко, поскольку они испытывают повышенный уровень отсутствия по болезни, особенно из-за воздействия вируса на их персонал.

Он сказал, что медсестры, которые должны быть в бригаде из четырех или пяти человек в отделении неотложной помощи, оказываются одними из трех, с более тяжелыми пациентами, но они работали героически усердно.

«Замечательно, как люди приходят в свои выходные, работают сверхурочно, работают по часам, особенно в эти рождественские и новогодние праздники, чтобы помочь своим коллегам, своим пациентам. Это все часть работы NHS, но люди от этого очень устают. И я также думаю, что люди также справляются с некоторыми очень разными вещами — серьезностью заболеваний, вызванных Covid, и количеством смертей, с которыми людям приходится справляться как в больницах, так и в других местах », — сказал он.

Если соловьиные больницы, которые в основном были законсервированы после весны, снова откроются, новых сотрудников не будет, но тех, кто сейчас находится в больницах, будет еще меньше. Майк Адамс, директор Королевского колледжа медсестер Англии, сказал Sky News, что ожидание значительного увеличения пропускной способности больниц Nightingale было неуместным. «Если нам придется отменить отпуск для персонала в этих местах, возникает очевидный вопрос: откуда возьмутся сотрудники, чтобы открыть« Соловьев »?» он сказал.

«Я уверен, что некоторые койки будут открыты, некоторые койки открыты в разных больницах Nightingale в разных районах страны. У меня есть серьезные опасения, что ожидания того, что это массовое развертывание может произойти, неуместны, потому что для этого нет персонала ».

Многие сотрудники NHS обеспокоены ложными заявлениями в социальных сетях о том, что больницы пусты. Дэйв Карр, медсестра отделения интенсивной терапии в больнице Святого Томаса в Лондоне, который чувствует, что может выступить в качестве представителя профсоюза Unite, является одним из многих, кто отчаянно нуждается в том, чтобы общественность знала, что происходит в их больницах в то время, когда дезинформация о вирусе распространена.

«Общественность должна быть в курсе того, что происходит. Это хуже, чем в первой волне, у нас больше пациентов, чем в первой волне, и эти пациенты так же больны, как и в первой волне. Очевидно, что у нас есть дополнительные методы лечения, которые мы можем использовать, но пациенты все еще умирают, и они умрут », — сказал он.

Карр добавил, что, хотя в Сент-Томасе было спасено больше жизней, эти пациенты должны быть госпитализированы на более длительный срок, что приводит к усилению нагрузки на больницы, «потому что мы действительно можем вылечить больше пациентов, чем в первый раз».Он предупредил, что Сент-Томас сейчас лечит пациентов из других больниц в этом районе, которые находились на грани «коллапса».

Взлет и упадок автомобильной промышленности

Инфраструктура для рекуперации материалов и рециклинга. Качество

этой инфраструктуры может либо способствовать, либо препятствовать озеленению

промышленных секторов. Подобные взаимозависимости также присутствуют в

, еще одной области экологических споров в автомобильной промышленности: о центральной роли стратегий ценообразования на нефть и бензин.

4.3. «Экологическая зрелость» автомобилей

Хотя автомобильная промышленность является зрелым экономическим сектором

, технологии, связанные с нынешней автомобильной системой

, предполагают, что автомобиль как промышленный продукт

, возможно, еще не достиг своей зрелости. . Как правило, знаки продукта de-

развиваются и изменяются в течение длительных периодов времени, в течение

фаз экспериментов, консолидации, зрелости и дальнейших

инноваций или упадка [48].Чтобы иметь экологические преимущества

, продукты должны развиваться от экспериментальных образцов

до «зрелых». Согласно Рою [49], скорость и степень

, в которой экологические проекты проходят стадии эволюции,

зависят от технических, коммерческих, рыночных и социально-политических факторов.

Чтобы продукт был успешным, переходя от экспериментов к этапам зрелости, необходимо, чтобы продукт достиг положительных

атрибутов с точки зрения большинства упомянутых факторов.Однако основным препятствием для использования продуктов

является не сам дизайн,

, а отсутствие соответствующего контекста для его принятия. Ограничения

на использование зрелого продукта, такого как велосипед, для позиции

, в большей степени связаны с отсутствием велосипедного оборудования, проблемами безопасности

и доминирующим положением автомобиля, а не с

конструктивные трудности или проблемы, присущие концепции.

Несколько инициатив были направлены на экологическую эффективность

автомобилей и связанных с ними производственных систем.Схемы с рейтингом

, такие как «Зеленая книга», представленная Американским советом по энергоэффективной экономике

, или «Зеленый индекс»

Калифорнийского консорциума передовых перевозок, могут указывать на лидеров и отстающих. автомобильная промышленность в

единицах расхода топлива и выбросов в атмосферу. Однако быть лидером

в таких рейтинговых системах не означает лидерства в области экологических инноваций

.С точки зрения экологической эффективности, сегодняшний автомобиль находится в зачаточном состоянии. Хотя двигатель внутреннего сгорания

чрезвычайно эффективен с точки зрения

его происхождения как технологической системы [18], автомобили с бензиновым двигателем

чрезвычайно неэффективны с точки зрения того, в какой степени

они преобразуют ресурсы в соответствующие ресурсы. энергия [50,51]. Концепция «гиперкара»

, выдвинутая Ловинсом, требует радикальных

изменений не только в конструкции автомобилей, но и в общей структуре

отрасли.По данным Lovins et al. [52], производители автомобилей серьезно рассмотрели концепт гиперкара (пример GM см. В [53]). За период

1993-1998 гг. Отрасль выделила 5,8 млрд. Евро на разработку

евро в соответствии с этой новой концепцией. Но такие изменения, al-

, хотя технически возможны, натолкнулись на ряд препятствий.

Они относятся к социально-техническому контексту отрасли.

5. Социально-технический контекст автомобильной промышленности

Признаки стресса и потенциальные источники структурных изменений

автомобильной промышленности уходят корнями во многие регионы

, которые не охватывают традиционное понятие «промышленность» .

Представляется необходимым новое понимание того, что составляет «контекст авто

мобильных телефонов» или автомобильной отрасли, как исследуется в этом разделе,

. За всю историю автомобильной промышленности широко доступны примеры того, как отрасль

столкнулась с задачей преодоления собственной структурной инерции, а

смог это сделать (см., Например, отчет Орсато

и др. [54] об усилиях отрасли по задержке введения в действие правил по отслужившим свой срок автомобилям в Европе).

Размер организации, тип структуры, стратегия, невозвратные инвестиции —

Вложения в системы производства и требования масштаба,

могут служить препятствием для радикальных изменений [55].

Потеря доли рынка американскими автомобильными компаниями до

их японских коллег в течение 1980-х годов, вероятно, является наиболее обсуждаемой темой

в этом отношении. Отсутствие открытости для

других «способов ведения дел» очень дорого обошлось американской автомобильной промышленности

.Лишь после значительных затрат на исследования, переподготовки рабочей силы и изменения знака производственных систем

отрасль частично вернула свои прежние позиции на рынке в 1990-х годах. Для целей

этой статьи необходимо извлечь важные уроки из

потери конкурентоспособности американскими производителями автомобилей в 1980-х годах, проблем, с которыми столкнулись некоторые японские производители автомобилей, такие как Nissan. и Mitsubishi в течение

1990-х годов, а также текущие проблемы, с которыми столкнулись GM и Ford.

5.1. «Автомобильное поле»

Поведение потребителей, а также споры между

поставщиками стали и алюминия указывают на сложность и

совокупности факторов, влияющих на структуру автомобильной промышленности. Возросшая роль использования электронных компонентов,

альтернативных пластиков, а также потенциал гибридных и аккумуляторных электрических трансмиссий или силовых агрегатов на топливных элементах

или топливных элементов для замены традиционного внутреннего двигателя внутреннего сгорания (ДВС)

увеличили шансы из

успеха для новых участников автомобильной промышленности за последние

несколько лет.Традиционные производители или, по крайней мере, те из них

, которые все еще выживают в 21 веке, остаются ключевыми игроками в этом секторе

Новейшая история отрасли требует

осознания изменений относительной важности некоторых игроков. Например, поставщики

электроники стали значительно более влиятельными за последние несколько лет. Более того, потенциал

новых участников стать центральными плательщиками в отрасли признается многими отраслевыми экспертами.Согласно Nieuwenhuis

и Wells [8, с. 3]: «автомобильная промышленность действительно представляет собой обширную

сфер экономической деятельности, и сосредоточить анализ только

на производителях транспортных средств было бы упущением большинства

отрасли». В этом отношении понимание индустрии

требует рассмотрения новых игроков, а также

социотехнической динамики в сочетании с их выдающимся вхождением

в автомобильный бизнес.

Аналитически концепция «организационного поля» из

, вдохновленная концепцией «автомобильного поля», кажется,

охватывает контекст, в котором может происходить экологическая модернизация автомобильной промышленности [

]. 55,56]. DiMaggio

и Пауэлл [57, p.148] определили организационное поле как «

признанную область институциональной жизни: ключевые поставщики, ресурсы

1003R.J. Орсато, П. Уэллс / Journal of Cleaner Production 15 (2007) 994e1006

Построение стабильного разворота РНК с помощью протонированного цитидина

Abstract

Разворот — классический трехмерный мотив сворачивания РНК, впервые идентифицированный в антикодон и Т-петли тРНК.Он также часто встречается в качестве строительного блока в других функциональных структурах РНК во многих различных последовательностях и структурных контекстах. U-повороты вызывают резкие изменения в направлении остова РНК и часто соответствуют 3-нуклеотидной консенсусной последовательности 5′-UNR-3 ‘(N = любой нуклеотид, R = пурин). Канонический мотив U-поворота стабилизируется водородной связью между иминогруппой N3 остатка U и 3′-фосфатной группой остатка R, а также водородной связью между 2’-гидроксильной группой уридина и N7 азот остатка R.Здесь мы демонстрируем, что протонированный цитидин может функционально и структурно замещать уридин в первой позиции канонического U-образного мотива в апикальной петле рибопереключателя неомицина. Используя ЯМР-спектроскопию, мы напрямую показываем, что иминогруппа N3 протонированного цитидина образует водородную связь с фосфатом основной цепи 3 ‘от третьего нуклеотида U-поворота аналогично иминогруппе уридина в каноническом мотиве. Кроме того, мы сравниваем стабильность водородных связей в мутантном U-образном мотиве с диким типом и описываем ЯМР-сигнатуру C + -фосфатного взаимодействия.Наши результаты имеют значение для предсказания структурных мотивов РНК и предлагают простые подходы для экспериментальной идентификации водородных связей между протонированными C-иминогруппами и фосфатным остовом.

Ключевые слова: структура РНК , U-образный поворот, протонированный цитидин, ЯМР, водородная связь

ВВЕДЕНИЕ

Многие молекулы РНК, такие как тРНК, рибосомные РНК, самосплайсинговые интроны, выполняют свои биологические функции, РНКазаP-РНК, или рибопереключатели, принимают сложные трехмерные глобулярные структуры, конкурирующие или даже превосходящие белковые структуры по своей сложности.Постоянно растущее число новых структур, полученных с помощью рентгеновских лучей или ЯМР, определенных для функциональных РНК, постоянно обнаруживает новые архитектуры трехмерных третичных структур РНК. Хотя все эти структуры сильно отличаются друг от друга, многие из них имеют более мелкие трехмерные мотивы или субмотивы сворачивания РНК в качестве общих структурных строительных блоков. Такими мотивами являются, например, стабильные тетрапетли (Woese et al. 1990; Allain and Varani 1995; Jucker and Pardi 1995a; Jucker et al. 1996), взаимодействия тетрапетли и рецептора (Costa and Michel 1995; Cate et al.1996), мотивы изгиба и поворота (Klein et al. 2001), рибозные застежки-молнии (Cate et al. 1996), мотивы E-петли (Wimberly et al. 1993; Wimberly 1994), A-минорные мотивы (Nissen et al. 2001), и различные типы поворотных мотивов. Классическим примером субмотива сворачивания РНК является так называемый мотив «разворота», который был первоначально обнаружен в ранних структурах тРНК, решенных Ричем и соавторами и Клугом и соавторами в 1970-х годах (Klug et al. 1974; Quigley and Rich 1976). Мотив U-поворота встречается как в антикодоновой, так и в TΨC-петле многих тРНК.Впоследствии было обнаружено, что мотив U-поворота широко распространен не только в тРНК, но и во многих других функциональных РНК, включая рибосомные РНК (например, Huang et al. 1996; Nagaswamy et al. 2001, pdb entry 1k5i; Zhang et al. 2001, запись pdb 1hs2), рибозим в форме головки молотка (Pley et al., 1994, запись pdb 1hmh; Doudna, 1995) и мяРНК (Stallings and Moore, 1997, запись pdb, запись 2u2a), а также элементы вирусной РНК (Puglisi and Puglisi 1998, pdb, запись 1bvj; Лю и др., 2007). Как уже следует из их названия, U-повороты вызывают резкий поворот в остове РНК и, следовательно, представляют одну возможность для введения петли шпильки в структуру РНК.В общем, мотивы U-поворота разделяют 3-нуклеотидную консенсусную последовательность 5′-UNR-3 ‘, где N означает любой нуклеотид, а R означает пуриновый нуклеотид. Изменение направления остова РНК происходит в фосфатной группе 3 ‘от остатка U консенсусной последовательности. Канонические развороты стабилизированы двумя водородными связями. Одна водородная связь образуется между иминогруппой уридина N3h4 и фосфатной группой в 3′-участке пуринового нуклеотида. Вторая водородная связь включает 2’-ОН группу уридина в качестве донора водородной связи и азот N7 пуринового основания в качестве акцепторной группы водородной связи.Несмотря на их 3-нуклеотидную консенсусную последовательность, U-повороты редко встречаются в виде изолированных тринуклеотидных шпилечных петель, закрытых стабильными парами оснований Уотсона-Крика. В большинстве случаев они являются частью более крупных петлевых структур, часто закрытых неканоническими сдвиговыми G: A, обращенными Hoogsteen A: U или парами оснований пиримидин: пиримидин (Gutell et al. 2000). Кроме того, дополнительные нуклеотиды могут быть вставлены в основном на 3 ‘от консенсусной последовательности U-поворота. Важно отметить, что эти дополнительные нуклеотиды часто подвергаются воздействию растворителя и поэтому доступны для дальнодействующих третичных взаимодействий с другими элементами РНК.Высокостабильные мотивы GNRA-tetraloop, которые также являются сайтами зародышеобразования для дальнодействующих взаимодействий РНК-РНК, имеют много общих структурных особенностей с мотивом U-поворота (Jucker and Pardi 1995b; Gutell et al. 2000), такие как основание-фосфатный водород. связывающее взаимодействие, водородная связь между 2’-OH-группой и N7-азотом консервативного пуринового основания, а также геометрия основной цепи в превращающейся фосфатной группе.

Рибопереключатель, воспринимающий неомицин, представляет собой синтетический регуляторный элемент гена, разработанный с помощью комбинированной процедуры отбора in vitro и in vivo для трансляционного контроля экспрессии гена в ответ на аминогликозид неомицин в Saccharomyces cerevisiae (Weigand et al.2008 г.). Имея минимальный размер всего 27 нуклеотидов, это самый маленький из известных лиганд-зависимых регуляторных элементов на основе РНК. Рибопереключатель имеет подобную шпильке вторичную структуру (A) и способен связывать свой лиганд неомицин с аффинностью в низком наномолярном диапазоне (Weigand et al. 2011). После вставки в 5′-UTR мРНК перед стартовым кодоном AUG он мешает сканированию малой субъединицы рибосомы лиганд-зависимым образом. Когда неомицин отсутствует, сканирующая малая субъединица рибосомы считывает структуру шпильки и достигает стартового кодона.В присутствии неомицина структура шпильки стабилизируется и является препятствием для малой субъединицы рибосомы. Шпилькообразная вторичная структура рибопереключателя неомицина формально закрыта сильно консервативным гексалупом с последовательностью 5′-U ₁₃ U ₁₄ U ₁₅ A ₁₆ A ₁₇ U ₁₈ -3 ‘, Который принимает четко определенную и жесткую структуру (A; Duchardt-Ferner et al. 2010, запись PDB 2kxm). Первый и последний нуклеотид гексалупа U13 и U18 образуют асимметричную цис- пару оснований Уотсона-Крика / Уотсона-Крика U: U, стабилизированную двумя прямыми водородными связями между двумя пиримидиновыми основаниями.Нуклеотиды U14, U15 и A16 складываются в каноническую структуру с U-образным поворотом с водородными связями между N3h4-иминогруппой U14 и 3′-фосфатной группой A16, а также между 2′-OH-группой U14 и N7. -азот A16 (B). A17 выходит из структуры петлей и достигает сайта связывания лиганда. Важно отметить, что это единственный нуклеотид в апикальной гексалупе, участвующий в прямом контакте с неомицином, и его конформация стабилизируется за счет укладки и электростатических взаимодействий между его основанием и лигандом (A).В принципе, образование пары оснований U13: U18 и сворачивание мотива U-поворота, охватывающего нуклеотиды от U14 до A16, уже можно наблюдать в отсутствие лиганда при низких температурах (Duchardt-Ferner et al. 2010). Однако связывание лиганда сильно стабилизирует все элементы петлевой структуры, взаимодействуя с A17 и, посредством косвенных эффектов, стабилизируя спиральный элемент ниже петли.

Структурные и функциональные характеристики неомицинового рибопереключателя и его мутанта U14C.( A ) Вторичная ( слева, ) и третичная ( справа, ) структура неомицинового рибопереключателя WT, связанного с рибостамицином. Остатки, которые участвуют в связывании лиганда, показаны открытыми буквами, а остатки, образующие разворот, показаны красным. Указан сайт мутации U14C. В трехмерной структуре лиганд рибостамицин показан в виде палочек. Положение основания A17, единственного нуклеотида апикальной петли, контактирующего с лигандом, отмечено стрелкой.( B ) ( Left ) 3D-структура апикальной петли комплекса WT РНК-рибостамицин, включающая мотив U-поворота и замыкающую пару оснований U13: U18 (Duchardt-Ferner et al. 2010). Отдельные нуклеотиды помечены в соответствии с цветовым кодом и схемой нумерации, используемыми в A . Водородные связи между иминогруппой U14 N3h4 и фосфатной группой 3 ‘от A16, а также между группой U14 2’-OH и азотом A16 N7 обозначены пунктирными красными линиями, а донорная и акцепторная группы помечены.U14, U15 и A16 используют классическую складку U-образного поворота, демонстрирующую все канонические стабилизирующие взаимодействия, показанные на схематическом представлении согласованного мотива U-поворота на правом . Взаимодействия при укладке отмечены удлиненными красными сферами. ( C ) Регуляторная активность гена in vivo мутанта U14C по сравнению с рибопереключателем WT, что отслеживалось в анализе репортерного гена GFP в S. cerevisiae в присутствии неомицина (черные столбцы) или в отсутствие лиганда (белые полосы). баров).( D ) ITC-титрование мутанта U14C лигандом неомицином. Приведена результирующая константа диссоциации.

В недавнем скрининге, направленном на идентификацию вариантов функциональных последовательностей апикальной петли неомицинового рибопереключателя, мы обнаружили, что замена U14 на остаток C (A) также приводит к функциональным рибопереключателям (Weigand et al. 2014). Такая мутация должна мешать правильной укладке и стабильности мотива U-поворота, потому что C лишен имино-протона и, таким образом, не способен образовывать водородную связь, аналогичную той, которая существует между U-иминогруппой и фосфатным остовом в канонической системе. Мотив разворота.

Интересно, что ранее сообщалось о заменах U с сохранением функции на C в биологически важных мотивах U-поворота. Напр., Стебель-петля V в рибозиме VS складывается в мотив U-поворота, который, как полагают, участвует в связывании субстрата (Campbell and Legault 2005; Campbell et al. 2006, pdb entry 1tbk, 1yn2). Мутация U-C в U696 в U-образном повороте является единственным вариантом, который сохраняет значительную активность рибозима (Rastogi et al. 1996). Другим примером является стебель-петля IIa дрожжевой U2 snRNA (SL2), которая содержит консервативный мотив U-поворота как часть консенсусной последовательности 5′-UAAY-3 ‘(Stallings and Moore 1997, pdb entry 2u2a).Мутант U56C-SL2 с последовательностью 5’-CAAC-3 ‘является единственной жизнеспособной альтернативой. Однако структурная основа способности C заменять U в этих РНК не установлена, и неясно, сохраняют ли мутантные РНК канонические структуры с разворотом.

Предполагая, что трехмерная петлевая структура в мутантах от U до C в этих системах должна сохраняться для сохранения функции, существует ряд способов рационализировать эти находки. Во-первых, возможно, что оставшиеся взаимодействия водородных связей и стэкинга достаточно сильны, чтобы сохранить складку этих петель, несмотря на отсутствие водородной связи между иминогруппой и фосфатом.Во-вторых, небольшой сдвиг положения основания в C-мутанте может привести аминогруппу C4 C в положение для водородной связи с фосфатом. В-третьих, C в мутанте может принимать редкую имино-таутомерную форму и затем образовывать водородную связь, эквивалентную U-иминогруппе. В-четвертых, C может протонироваться в положении N3 и образовывать водородную связь, а также ионное взаимодействие с отрицательно заряженной фосфатной группой. Недавние биоинформатические исследования и квантово-химические исследования взаимодействий основание-фосфат показали, что аминогруппы цитидина способны образовывать высокостабильные водородные связи с фосфатным остовом, но не обсуждали доказательства взаимодействия между протонированными основаниями цитозина и фосфатными группами (Zirbel et al.2009 г.).

Здесь мы подробно исследовали структурные основы сохранения функции в U14C-мутанте комплекса неомицин рибопереключатель-лиганд с помощью ЯМР-спектроскопии. Мы обнаружили, что C14 стабильно протонирован и образует водородную связь, которая изостерична связи между U-иминогруппой и фосфатом в каноническом мотиве U-поворота, тем самым сохраняя общую складку апикального гексалупа рибопереключателя. Используя методы ЯМР, мы охарактеризовали силу водородной связи между протонированным C и фосфатной основной цепью и обнаружили, что она очень стабильна в широком диапазоне температур и значений pH.Просматривая pdb, мы обнаружили дополнительный пример функциональной и структурной замены канонического разворота типа UNR разворотом типа C + NR. Кроме того, протонированные C-остатки могут играть роль в стабилизации дальнодействующих третичных взаимодействий РНК-РНК.

Таким образом, наши результаты имеют последствия для предсказания трехмерных структур РНК по последовательностям, поскольку они расширяют консенсусную последовательность с разворотом и могут служить примером того, как протонированные остатки цитидина и их взаимодействия могут быть легко идентифицированы современными методами ЯМР. .

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Цитидин способен функционально замещать уридин в U-образном повороте неомицинового рибопереключателя

Во время in vivo скрининга библиотеки неомициновых рибопереключателей с рандомизированной апикальной гексалой (нуклеотиды 13–18), последовательности с мутацией U в C в положении 14 были идентифицированы как функциональные, несмотря на их очевидное отклонение от структурно важной консенсусной последовательности U-поворота (C; Weigand et al. 2014). Однако по сравнению с рибопереключателем WT их регулирующая способность немного снижена.Рибопереключатель WT подавляет экспрессию gfp в 8,6 раза в присутствии 100 мкМ неомицина в среде, тогда как мутант U14C обеспечивает только трехкратное снижение экспрессии gfp (C). Эксперименты ITC в условиях, описанных ранее для WT (Weigand et al. 2011), показывают, что мутант U14C связывается с неомицином in vitro с K _D, равным 24,2 нМ (D). Таким образом, сродство мутанта лишь незначительно снижается по сравнению с рибопереключателем WT, который связывает неомицин с K _D из 9.2 нМ (Weigand et al. 2011). Это уже предполагает, что структура лиганд-связывающего кармана рибопереключателя не сильно изменяется из-за мутации в мотиве U-поворота его апикальной петли.

C14 является N3-протонированным и образует водородную связь с фосфатной группой остова, как в каноническом U-образном мотиве

Хотя в функциональных исследованиях in vivo и в экспериментах по связыванию ITC в качестве лиганда использовался неомицин, все ЯМР-эксперименты проводили с рибостамицином в качестве лиганда.Как подробно продемонстрировано в наших предыдущих исследованиях ЯМР рибопереключателя неомицина (Duchardt-Ferner et al. 2010), меньший лиганд рибостамицин связывается с рибопереключателем с тем же способом связывания, что и неомицин. Однако из-за отсутствия кольца IV в рибостамицине наблюдается пониженное перекрытие сигналов в некоторых областях спектров ЯМР. Кроме того, мы могли напрямую перенести назначения сигналов ЯМР из наших более ранних исследований ЯМР комплекса рибопереключатель-рибостамицин WT на мутант U14C.

Иминопротонный 1D- ¹ H-ЯМР-спектры WT и мутанта U14C в комплексе с рибостамицином очень похожи, что позволяет предположить, что трехмерная структура мутантного комплекса U14C очень похожа на WT (A, вверху ).Важно отметить, что для обоих комплексов присутствуют резонансы имино-протонов U13 и U18, которые демонстрируют очень похожие химические сдвиги и ширину линий. Это указывает на то, что пара оснований U13: U18, непосредственно смежная с мотивом U-поворота и сайтом мутации, присутствует в обоих комплексах и имеет сходную стабильность (дополнительный рис. 1). Единственное очевидное различие между двумя спектрами — отсутствие сигнала, соответствующего иминогруппе U14, при 10,87 м.д. в мутанте U14C, чего и следовало ожидать (A, вверху).Однако при более внимательном рассмотрении спектра мутанта U14C обнаруживается новый имино-протонный сигнал с химическим сдвигом 12,83 м.д. при 10 ° C. Подобные значения химического сдвига обычно наблюдаются для имино-протонов гуанина в парах оснований Уотсона-Крика, но также сообщалось для имино-протонов протонированных цитидинов в тройках оснований, когда они образуют водородные связи с карбонильными группами гуанина (Nixon et al. 2002a, b; Cornish и др., 2006). Напротив, иминопротоны протонированных цитидинов в тройках оснований (например,g., Holland and Hoffman 1996; Бродский и др. 1998; Корниш и др. 2006; Cash et al. 2013) или в i-мотиве ДНК (Guéron and Leroy 2000; Lieblein et al. 2012) с водородными связями с акцепторами азота имеют химические сдвиги более 14,5 ppm. Эксперименты 2D-NOESY показывают, что новый имино-протонный резонанс имеет кросс-пики NOE с имино-протонами U13 и U18 (A, внизу; дополнительный рис. 2). Подобные перекрестные пики ранее наблюдались для имино-протонного резонанса U14 в рибостамициновом комплексе WT рибопереключатель (Duchardt-Ferner et al.2010). Эксперимент ¹ H, ¹⁵ N-HSQC с U14C-мутантной РНК, селективно меченной ¹³ C, ¹⁵ N-цитидином, показывает, что иминопротон связан с цитидином N3 с химическим сдвигом азота. 144,4 частей на миллион. Скалярная константа взаимодействия между имино-протоном и азотом N3 ¹ J _HN составляет 102 Гц, что находится в том же диапазоне, что и скалярные константы связи с одной связью, наблюдаемые в иминогруппах гуанозина и уридина (A, в середине).Напротив, скалярное связывание ¹ J _HN, измеренное для иминогруппы в парах оснований C +: C в i-мотиве в ДНК, значительно меньше (∼45 Гц), поскольку там протон делокализован в N + Водородная связь H… N (Либлейн и др., 2012). Корреляции NOE, эксперимент ¹ H, ¹⁵ N-HSQC для аминогрупп (дополнительный рис. 3A) и эксперимент 2D-H (N) C (B) с образцом, меченным селективно цитидином, соединяют иминогруппа цитидина с аминогруппой того же цитидина с протонными химическими сдвигами 8.58 и 7,43 частей на миллион (B) и химический сдвиг азота 102,1 частей на миллион (дополнительный рис. 3A). Таким образом, N3-протонирование C14 происходит не из-за присутствия нейтральной имино-таутомерной формы, но остаток C14 находится в положительно заряженном, N3-протонированном состоянии. Химические сдвиги аминогрупп для C14 значительно отличаются от тех, о которых сообщается для других протонированных остатков цитидина (Holland and Hoffman 1996; Brodsky et al. 1998; Cornish et al. 2006). Там сообщалось о химических сдвигах от 11,7 до 8,5 частей на миллион для аминопротонов.Кроме того, химические сдвиги аминного азота для протонированных цитидинов, о которых сообщалось ранее, превышали 111,0 ppm (Nixon et al. 2002b; Cornish et al. 2005, 2006).

Характеристика протонированного цитидина в мутантном U14C комплексе рибопереключатель-рибостамицин. ( A ) ( Top ) Сравнение спектров 1D-имино протонов WT и мутантной РНК, связанной с рибостамицином. Назначения резонанса даны для WT. ( Середина ) Имино-область ¹ H, ¹⁵ N-HSQC спектры с и без ¹⁵ N-развязка в прямом измерении, записанная выборочно ¹⁵ N-цитидин-меченный U14C-рибосвитч-рибостамицин сложный.Указывается константа связи ¹ J _HN. ( Bottom ) Имино-область спектра 2D-NOESY мутанта U14C в комплексе с рибостамицином. Назначение резонансов дано для диагональных пиков. NOE, указывающий на пространственную близость между имино-протонами C14 и U13, выделен пунктирными линиями. ( B ) Спектр 2D-H (N) C, записанный с использованием селективно меченного ¹³ C, ¹⁵ N-цитидином образца мутанта U14C, связанного с рибостамицином.Резонанс C4 коррелирует с химическим сдвигом аминогрупп ¹ H для всех цитидинов (серые пунктирные линии). Для C14 резонанс C4 подключен одновременно к частотам имино- и аминогруппы ¹ H (красная пунктирная линия). Путь переноса намагниченности для этого эксперимента обозначен красными стрелками на вставке , показывающей структуру протонированного цитидина. ( C ) 1D- ³¹ P-спектры мутанта WT и U14C ( верхний ) и 2D- ¹ H, ³¹ P-дальнодействующий HSQC-спектр мутанта U14C ( нижний ).Фосфорные резонансы, демонстрирующие необычные химические сдвиги, отнесены к спектру 1D- ³¹ P WT. Проекция показана вдоль водородного измерения дальнодействующего HSQC, а резонансы, вызывающие перекрестные пики, соединены пунктирными линиями и помечены. Смоделированная трехмерная структура мотива U-поворота, содержащего протонированный цитидин в первом положении, показана как вставка . Водородные связи, наблюдаемые в виде перекрестных пиков в HSQC ¹ H, ³¹ P-дальнодействующих, обозначены пунктирными оранжевыми линиями в структуре, а донорные и акцепторные группы окрашены в соответствии с типом атома.

Необычная структура остова РНК апикального мотива гексалупа лигандного комплекса WT с рибопереключателем WT с конкатенацией неканонической пары оснований U13: U18, U-витком, содержащим U14, U15 и A16, и выпуклым A17. в его спектре ³¹ P-ЯМР (C, вверху). В соответствии с предыдущими наблюдениями для других структур с разворотом (Моросюк и др., 2001; Кэмпбелл и др., 2006), резонансы ³¹ P фосфатных групп 3 ‘от U14 (превращающийся фосфат разворота), U15 и A17 смещены в более слабое поле по сравнению с основной массой фосфатных групп основной цепи.Фосфатная группа 3 ‘от A16, которая связана водородными связями с иминогруппой U14 согласно консенсусу U-поворота, смещена в более сильное поле по сравнению с основной массой P-резонансов ³¹. Важно отметить, что этот «отпечаток пальца» химического сдвига ³¹ P полностью законсервирован в мутантной РНК U14C (C, вверху), что указывает на то, что структура остова РНК дикого типа и мутантной РНК очень похожа. Примечательно, что резонанс ³¹ P фосфатной группы 3 ‘из A16 смещен еще сильнее по сравнению с WT (C, вверху), вероятно, из-за его пространственной близости и водородной связи с иминогруппой протонированного C14.Спектр HSQC 2D ¹ H, ³¹ P показывает прямую корреляцию между имино-протоном C14 h4 и этим резонансом ³¹ P из-за наличия небольшой скалярной связи между этими двумя спинами (C , Нижний). Таким образом, этот эксперимент непосредственно демонстрирует существование водородной связи между иминогруппой N3h4 протонированного C14 и фосфатом основной цепи 3 ‘от A16. Эта водородная связь точно соответствует консенсусной структуре U-поворота. Вторая корреляция, наблюдаемая в этом спектре, обусловлена водородной связью между группой A16 2’-OH и фосфатной группой 3 ‘из A17.Эта корреляция ранее наблюдалась для комплекса РНК дикого типа с рибостамицином, что дополнительно подтверждает близкое структурное сходство между структурой РНК дикого типа и мутантной РНК. Примечательно, что, несмотря на их малую ширину линии и интенсивные сигналы ЯМР, аминопротоны C14 не показывают корреляций в HSQC ¹ H, ³¹ P-long-range HSQC, что позволяет предположить, что они не участвуют в дополнительных взаимодействиях водородных связей с фосфат, насколько это возможно, например, в виде разветвленной водородной связи.Отсутствие водородных взаимодействий с участием аминогруппы C14 может объяснить отклонение химических сдвигов от тех, о которых сообщалось ранее для остатков C + в других РНК, содержащих тройки оснований. В этих случаях аминогруппы непосредственно связаны водородными связями либо с карбонильным кислородом C6 (Holland and Hoffman 1996; Brodsky et al. 1998), либо с азотом N7 гуанина (Nixon et al. 2002b; Cornish et al. 2006). .

Предыдущие исследования установили, что химические сдвиги азота (Wang et al.1991) и ядер углерода (Legault and Pardi 1994, 1997) оснований являются превосходными репортерами их состояния протонирования и даже могут использоваться для определения значений pK _a отдельных оснований в сложных структурах РНК (Legault and Парди 1994; Кай и Тиноко 1996; Равиндранатан и др. 2000; Луптак и др. 2001; Хупплер и др. 2002). В соответствии с этими предыдущими наблюдениями, мы обнаруживаем, что протонирование по N3 значительно влияет на другие химические сдвиги, связанные с C14, в частности, на гетероатомы.В соответствии с выводами Legault и Pardi (1997) для протонированного 5′-CMP, наиболее выраженные эффекты наблюдаются для химических сдвигов ядер углерода C4 и C2. Резонансная частота углерода C4 смещена в сильное поле на> 4,3 ppm (B), а резонансная частота C2 смещена в сильное поле на> 4,8 ppm (дополнительный рис. 3F), соответственно, по сравнению с непротонированными остатками цитидина в той же молекуле. Хотя они все еще демонстрируют экстремальные значения химического сдвига, химические сдвиги C6, C5, N1 и C1 ‘для C14 менее сильно отличаются от таковых для непротонированных цитидинов (дополнительный рис.3B – E). Направление изменения химического сдвига, вызванного протонированием цитидина, такое же, как наблюдалось ранее для протонированного CMP (Legault and Pardi 1997). C6 и C1 ‘C14 смещены в сторону слабого поля, тогда как C5 у C14 сдвинуты в сильное поле по сравнению с химическими сдвигами, обнаруженными для непротонированных остатков цитидина (дополнительный рис. 3). Как и ожидалось (Wang et al., 1991), химический сдвиг азота N3 для C14 (144,4 ppm) также четко отделен от основной части резонансов цитидина N3 (195-200 ppm) и находится в том же диапазоне химического сдвига, что и для протонированные цитидины в тройках оснований (142.7 ppm, 138,4 ppm), стабилизирующий структурно родственные псевдоузлы (Nixon et al. 2002b; Cornish et al. 2005, 2006).

Поскольку химические сдвиги C4 и C2 показывают самые большие изменения при протонировании, мы попытались использовать эти химические сдвиги для определения значения pK _— для протонирования C14 путем записи спектров H (N) C при различных значениях pH. Однако при pH 8,2 мы наблюдаем практически те же химические сдвиги C4 и C2 для C14, что и при pH 6,2 (дополнительный рис. 4A, B). Мы также не наблюдали второй набор сигналов для C14 в спектре ¹ H, ¹³ C-HSQC (дополнительный рис.4C), как и следовало ожидать, когда протонированные и депронтонированные частицы будут сосуществовать в медленном химическом обмене (Cai and Tinoco 1996). Это указывает на то, что даже при pH 8,2 C14 существует почти исключительно в протонированном состоянии. Более высокие значения pH не могут быть протестированы, поскольку тогда функциональные группы лиганда становятся значительно депротонированными (Freire et al. 2007), что приводит к изменениям в его РНК-связывающих свойствах. Однако наши данные предполагают, что значение pK _a C14 больше 8,2 и, следовательно, более чем на четыре единицы pH выше значения pK _a изолированного CMP (Legault and Pardi 1997; Wilcox et al.2011). Однако такие сильные сдвиги pK _a из-за участия протонированного остатка в формировании стабильных вторичных и третичных структур РНК не беспрецедентны (Wilcox and Bevilacqua 2013).

Водородная связь между протонированным цитидином и фосфатным остовом очень стабильна

Чтобы качественно оценить стабильность водородной связи между протонированным C14 и фосфатным остовом по сравнению с другими парами оснований в комплексе рибопереключатель-лиганд, мы записали спектры имино-протона 1D- ¹ H ЯМР- и 1D- ¹ H, ¹⁵ N-HSQC с использованием образца, селективно меченного цитидином, при различных температурах и значениях pH (A, B; дополнительный рис.5). Из этих экспериментов сразу видно, что эта водородная связь очень устойчива. Сигнал имино-протона C14 все еще обнаруживается при 35 ° C и pH 6,2 (A). При pH 8,2 иминопротон обнаруживается (B) при температурах до 25 ° C (дополнительный рисунок 5A). Ширина линии сигнала имино-протона C14 во всех этих условиях аналогична ширине линии сигнала U14 в WT, а также многих других сигналов имино-протона (A; дополнительные рисунки 1, 5). Таким образом, стабильность C14 + -фосфатного взаимодействия сравнима со стабильностью канонических взаимодействий спаривания оснований.

Устойчивость водородной связи цитидин-N3h4-фосфатной группы. ( A ) 1D- ¹ H, ¹⁵ N-HSQC Спектры селективно меченой ¹⁵ N-цитидином мутантной РНК U14C ( слева ) и равномерно ¹⁵ N-меченой РНК WT ( справа ) в комплексе с рибостамицином при разных температурах и pH 6,2. ( B ) 1D- ¹ H, ¹⁵ Спектры N-HSQC для имино-протона U14C при значениях pH 6,2 и 8.2 и температуре 10 ° C. ( C ) Скорости обмена имино-протонного растворителя для мутантов WT и U14C при различных температурах. Скорость обмена в Гц представлена как функция температуры. ( D ) Перекрестный (красный) и эталонный (черный) спектр количественного эксперимента спин-эхо 1D ³¹ P {¹ H} для мутанта U14C с задержкой эволюции 40 мсек при 22 ° C. 3′-фосфатные группы U8, A16 и A17 (обозначенные как U8, A16 и A17) все участвуют во взаимодействиях водородных связей, на что указывает снижение интенсивности сигнала в перекрестном эксперименте, тогда как 3′-фосфатная группа C14 ( помечен как C14) нет.( E ) Количественная оценка скалярных констант связывания ^2h J _HP между фосфатной группой 3 ‘из A16 и C14 h4 или U14 h4 в мутанте или WT, соответственно. Отношения интенсивностей сигналов между спаренным крестом (I _cross) и несвязанным эталонным экспериментом (I _ref) для мутанта (серый) и WT (черный) нанесены на график в зависимости от продолжительности задержки эволюции τ. Данные были подогнаны с использованием уравнения I _cross / I _ref = cos (π ^2h J _HP τ) для получения константы связи ^2h J _HP.

Стабильность индивидуальных водородных связей может быть определена из экспериментов по обмену имино-протонным растворителем (Leroy et al. 1988). В этих экспериментах намагниченность протонов объемной воды передается имино-протонам путем химического обмена. Константа скорости передачи намагниченности воды отдельным имино-протонам коррелирует со скоростью раскрытия пары оснований, которая является прямой мерой стабильности пары оснований. Скорости водообмена для протона U14 h4 в комплексе WT рибопереключатель-рибостамицин и протона C14 h4 мутантного комплекса регистрировали как функцию температуры (C).Наши данные показывают, что водородная связь с участием иминогруппы протонированного C14 лишь немного менее стабильна, чем каноническая водородная связь с U-разворотом, включающая иминогруппу U14 в WT.

Другой мерой прочности водородной связи является размер скалярной связи с двумя связями транс -водородная связь между протоном донора водородной связи и акцепторной группой водородной связи. Кажущаяся константа скалярного взаимодействия ^2h J _HP между имино-протоном h4 C14 и 3′-фосфатной группой A16 была определена в количественном спин-эхо-эксперименте 1D- ³¹ P {¹ H} ( D, E; Duchardt-Ferner et al.2011) должно быть не менее 3,05 Гц. Таким образом, эта константа связи аналогична по размеру константе связи ^2h J _HP с участием имино-протона U14 в РНК WT (нижний предел 2,2 Гц), что согласуется с сопоставимой силой водородных связей в обеих РНК. Кажущееся ^2h J _HP -скалярное соединение между протоном 2′-OH A16 и фосфатной группой A17 в РНК WT немного меньше (1,8 Гц). Для сравнения, ^2h J _HP -скалярное связывание, измеренное между амидным и гидроксильным протонами протеина и фосфатной группой связанного FMN, находится в диапазоне от 0.От 5 до 1,7 Гц (Löhr et al. 2000), тогда как константа связи 1,3 Гц была измерена между протоном боковой цепи аргинина в маломолекулярном рецепторе и нековалентно связанной фосфатной группой (Federwisch et al. 2008).

Замена уридина протонированным цитидином также происходит в других мотивах разворота

Чтобы проверить наличие других взаимодействий водородных связей между группами фосфатной основной цепи и потенциально протонированными остатками цитидина, мы проанализировали все рентгеновские структуры РНК и RNP с номинальным разрешением лучше 2.5 Å присутствует в pdb для коротких (<3,0 Å) кислородных расстояний N3-фосфатной группы цитидина. Одно такое короткое расстояние по кислороду цитидиновой N3-фосфатной группы (2,6 Å) было обнаружено в рентгеновской структуре с высоким разрешением большой рибосомной субъединицы из архея Haloarcula marismortui (Klein et al. 2004, pdb запись 1s72). Это наблюдается между нуклеотидом C1469 и фосфатной группой 3 ‘из нуклеотида A1471, которые оба расположены в пенталупе 5’-C ₁₄₆₉ AACU-3′, закрытом парой оснований G-C (A).Если бы C1469 был U, первые 3 н. Этой pentaloop соответствовали бы классической консенсусной последовательности U-поворота. Как короткое расстояние N3… O = P, так и угол между донорной и акцепторной группами согласовывались бы с наличием водородной связи, если бы C1469 был протонирован по азоту N3. Важно отметить, что водородная связь между 2′-OH-группой C1469 и N7 A1471 также присутствует в этой петле, что соответствует второй водородной связи консенсусной структуры с U-разворотом (A). Измерения углов скручивания основной цепи подтверждают, что поворачивающийся фосфат в этом пенталаупе является фосфатом, находящимся сразу на 3 ‘от C1469, как и ожидалось для структуры с разворотом.Таким образом, эта петля в 23S рРНК H. marismortui , скорее всего, является еще одним примером структуры с U-разворотом с протонированным C вместо U в первом положении ее консенсусной последовательности. Примечательно, что в 23S рРНК термофильного архея Thermococcus celer та же петля содержит каноническую U-образную последовательность 5′- UAA CU-3 ‘, тогда как 23S рРНК Escherichia coli содержит стабильную тетрапетлю GNRA. положение, как и ожидалось, если трехмерная структура сохраняется в этом положении в рРНК (B).

Возникновение водородных связей между протонированными фрагментами цитидина N3 и фосфатными группами основной цепи в других РНК. ( A ) Остатки 1469–1472 из рентгеновской структуры 23S большой рибосомной субъединицы Haloarcula marismortui (запись pdb 1s72), которые образуют мотив разворота с цитидином в первой позиции. Возможные водородные связи обозначены пунктирными красными линиями, а расстояния между донорным азотом и акцепторным кислородом указаны. Донор и акцептор окрашены в соответствии с типом атома.( B ) Первичная и вторичная структуры петли шпильки между остатками 1466 и 1476 в 23S РНК в H . marimortui ( слева, ) и соответствующие области в T. celer ( средний ) и E. coli ( справа ). ( C ) Срез рентгеновской структуры малой субъединицы рибосомы из T. thermophilus (запись pdb 2vqe), содержащий потенциальное дальнодействующее взаимодействие C + -фосфатной основной цепи.Возможные водородные связи между протонированной иминогруппой цитидина С1321 и аминогруппами С1322 и С1320 с фосфатами акцепторной основной цепи показаны пунктирными красными линиями, и даны соответствующие расстояния. ( D ) Вторичная структура соответствующей области 16S РНК из T. thermophilus. Дальнодействующее взаимодействие, подробно изображенное на атомной детали в C , обозначено красной линией. ( E ) Срез рентгеновской структуры малой субъединицы рибосомы из E.coli (запись в pdb 2qal). Потенциальные водородные связи иминопротона уридина U1321 и аминогрупп C1320 и C1322 с фосфатами акцепторной основной цепи показаны пунктирными красными линиями; указаны расстояния. ( F ) Вторичная структура соответствующего участка 16S РНК из E. coli. Дальнее взаимодействие, подробно показанное в E , обозначено красной линией.

Водородная связь между протонированными цитидинами и фосфатным остовом может играть роль в обеспечении дальнодействующих взаимодействий третичной РНК-РНК

Поиск коротких расстояний между атомами азота цитидина N3 и атомами кислорода фосфатной группы также выявил предполагаемое взаимодействие водородных связей между C1321. и фосфат 3 ‘из нуклеотида G1221 в структуре малой рибосомной субъединицы из Thermus thermophilus (C; Kurata et al.2008, запись PDB 2vqe). В этом случае C1321 является частью более крупной высокоструктурированной петли, соответствующей мотиву T-петли (Nagaswamy and Fox 2002), в то время как nt G1221 является частью последовательно и структурно удаленного спирального элемента A-формы (спираль 32) (D) . Опять же, расстояние N3… O = P и угол между атомами донорной группы и акцептором весьма наводят на мысль о водородной связи, если C1321 протонирован. Интересно, что эквивалентное взаимодействие водородных связей присутствует в том же положении в 3.Рентгеновская структура 0-Å рибосомы E. coli (E, F), где, что примечательно, C заменен на U (Боровинская и др., 2007, pdb, запись 2qal). Следовательно, кажется вероятным, что взаимодействия между протонированными цитидинами и группами фосфатного остова могут играть более общую роль в стабилизации третичных структур больших и структурно сложных РНК. По-видимому, протонированные цитидины могут заменять уридины не только в разворотах, но и в более сложных элементах структуры.

Таким образом, мы показали здесь, что протонированный цитидин (C +) может функционально и структурно замещать уридин в первом положении классического U-образного мотива, образуя очень стабильную водородную связь с отрицательно заряженным фосфатным остовом в неомицине. рибопереключатель.Другой пример функциональной и структурной эквивалентности классических и C + -содержащих U-поворотов обнаружен в 23S рРНК. Возможность замены U на протонированный остаток цитидина в U-образных структурах также поможет объяснить мутационные данные для других функциональных РНК, как, например, для рибозима VS (Rastogi et al. 1996) или SL2 мяРНК U2. (Столлингс и Мур 1997). Кроме того, протонированные остатки цитидина могут играть более общую роль в стабилизации третичных структур РНК за счет образования прочных ионных водородных связей с группами фосфатной основной цепи.Уникальная сигнатура гетероядерного химического сдвига выбранных гетероатомов в фрагментах азотистых оснований протонированных цитидинов может помочь в их быстрой экспериментальной идентификации даже в тех случаях, когда имино-протон h4 не наблюдается напрямую из-за быстрого химического обмена с растворителем или в случаях, когда цитидин остатки только временно протонируются, как недавно постулировали в ДНК (Nikolova et al. 2011).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Анализ активности GFP

Регуляторная активность гена рибопереключателя неомицина WT и мутанта U14C в ответ на неомицин была протестирована с помощью анализа репортерного гена зеленого флуоресцентного белка in vivo в S.cerevisiae , как описано ранее (Weigand et al. 2008).

Подготовка образца

Немеченый, выборочно ¹⁵ N-цитидин- и селективно ¹³ C, ¹⁵ N-цитидин-меченые образцы для мутанта U14C РНК неомицина рибопереключателя с последовательностью 5′-GGCUGUCUUGCCUGCC 3 ‘были синтезированы путем транскрипции in vitro с использованием РНК-полимеразы Т7 и линеаризованной плазмидной ДНК в качестве матрицы. ¹⁵ N- и ¹³ C, ¹⁵ N-меченные нуклеотидтрифосфаты коммерчески доступны (Silantes GmbH).Для создания однородных 3′-концов первичные транскрипты РНК содержали рибозим в форме головки молотка. Обработанные транскрипты РНК очищали препаративным денатурирующим PAGE согласно стандартным протоколам. Очищенную РНК свернули путем нагревания до 95 ° C в течение 5 минут с последующей инъекцией в пять эквивалентов ледяной воды. Затем образцы повторно буферизовали и концентрировали с использованием концентраторов виваспина (пороговая молекулярная масса 3000 Да). Концентрации образца составляли 800 мкМ для немеченого, 616 мкМ для образца, меченного ¹⁵ N-цитидин, и 660 мкМ для образца, меченного ¹³ C, ¹⁵ N-цитидин.Все образцы ЯМР были приготовлены в буфере ЯМР, содержащем 25 мМ фосфата калия (pH 6,2 или 8,2) и 50 мМ KCl. Образцы титровали 1,2 эквивалентами коммерчески доступного рибостамицина (Sigma-Aldrich). Насыщение РНК рибостамицином подтверждалось исчезновением иминорезонансов свободного рибопереключателя в спектрах 1D- ¹ Н. Замену буфера проводили для образца, меченного ¹³ C, ¹⁵ N-цитидином, с буфером для ЯМР при pH 8,2 с использованием концентраторов виваспина (пороговая величина MW 3.000 Да).

Спектроскопия ЯМР

Все спектры ЯМР были получены с помощью спектрометров Bruker Avance 600 МГц и 800 МГц, оборудованных 5-миллиметровыми головками зондов с криогенным тройным резонансом HCN и HCP с z-градиентом. Для определения констант взаимодействия ^2h J _HP были получены количественные спин-эхо-спектры ³¹ P {¹ H} -1D на спектрометре Bruker DRX300, оборудованном 5-миллиметровым BBO z- при комнатной температуре. головка градиентного зонда, как описано ранее (Duchardt-Ferner et al.2011). Большинство назначений ЯМР-резонанса для мутанта U14C может быть перенесено из РНК WT (Duchardt-Ferner et al. 2010; Schmidtke et al. 2010). Дополнительные эксперименты по определению резонанса ЯМР для U14C-мутантной РНК были записаны при 10 ° C в 10% (об. / Об.) D ₂ O для обменного протона и в 100% (об. / Об.) D ₂ O при 25 ° C для незаменяемых протонов. 2D- ¹ H, ¹ H-NOESY-, 2D- ¹ H, ¹⁵ N-HSQC- (Боденхаузен и Рубен, 1980) и 2D-H (C) N- (Sklenar et al.1993) эксперименты проводились с использованием стандартных импульсных последовательностей (Fürtig et al. 2003). Отнесение резонансов цитидина C4 было получено в эксперименте 2D-H (N) C с азотным смещением, центрированным на уровне 130 ppm. Распределение резонансов C2 непротонированных цитидинов было получено из эксперимента 2D-H6 (C6N1) C2 (Fürtig et al. 2004). Все данные ЯМР обрабатывали с помощью TOPSPIN2.1 (Bruker Biospin).

Измерения замены растворителя для мутантных имино-протонов WT и U14C регистрировали с помощью модифицированного эксперимента 2D- ¹ H, ¹⁵ N-HSQC (Rinnenthal et al.2010), содержащий мягкий импульс 180 ° -RE-BURP (Geen and Freeman, 1991), применяемый к частоте воды. Были использованы переменная задержка восстановления инверсии от 4 мкс до 3000 мс и задержка рециркуляции 6 с. Данные были собраны в диапазоне температур от 0 ° C до 40 ° C. Подгонка кривой интенсивности сигналов и определение обменных курсов проводилось, как описано (Rinnenthal et al. 2010), с использованием OriginLab 8.1.

Поиск в базе данных

Из списка неизбыточных структур РНК в банке данных белков (версия 1.16 — 22.06.2013), который был скомпилирован и опубликован на веб-сайте RNA 3D Hub (http://rna.bgsu.edu/rna3dhub/) BGSU RNA Group, все структуры с разрешением 2,5 Å или лучше были выбраны. Набор данных включал 378 рентгеновских структур. Создан макрос на языке программирования Python для визуализации полученных структур в программе PyMol и анализа расстояний. Образцы водородных связей между потенциально протонированными цитидинами и атомами кислорода фосфатных групп основной цепи РНК анализировали путем выбора атомов N3 остатков цитидина и атомов кислорода фосфатных групп OP1 и OP2 фосфатной основной цепи.Были измерены расстояния между атомами азота и кислорода, и все расстояния менее 3,0 Å были сохранены как предполагаемые водородные связи.

Проект U-Turn: увеличение количества активных перевозок в Джексоне, штат Мичиган

Фон: Джексон, штат Мичиган, — город среднего размера, страдающий от плохой экономики и проблем со здоровьем, связанных с ожирением. Почти 20% из 36 000 жителей живут за чертой бедности.Это относительно молодой город (средний возраст 30 лет) со смешанной этнической принадлежностью (20% черных, 73% белых, 4% латиноамериканцев). Город предлагает множество структурированных возможностей для активного отдыха, но не интегрировал физическую активность в повседневную жизнь.

Вмешательство: Проект U-Turn был направлен на увеличение количества активных транспортных средств (например, езды на велосипеде, пеших прогулок и использования общественного транспорта) за счет интегрированного подхода к модели действий сообщества Active Living by Design и модели Michigan Safe Routes to School.Ресурсы были сосредоточены на акциях и программах активного образа жизни; партнерские встречи были источником изменений в политике и физических проектах. Каждая инициатива была разработана для того, чтобы представить каждый из 5P (подготовка, продвижение, программы, политика и физические проекты) для создания поддержки для общей работы партнерства.

Полученные результаты: В рамках партнерства были собраны данные о поведении населения при ходьбе и езде на велосипеде, процент учащихся, идущих в школу, участие в мероприятиях и программах, а также новые физические проекты.Джексон увидел значительное улучшение физической инфраструктуры и политики и связанное с этим увеличение числа пешеходов и велосипедистов в сообществе.

Уроки выучены: Проект был вовлечен в целенаправленное построение партнерских отношений для реализации эффективных программ и рекламных акций, обеспечивающих поддержку политических и физических проектов. Ограниченные ресурсы лучше всего использовались, поощряя партнеров вносить свой вклад и координировать деятельность с использованием имеющегося персонала, финансирования и ресурсов.

Выводы: Джексон заметил сдвиг в сторону осознания преимуществ активного образа жизни для здоровья населения, экономического развития и экологической осведомленности.

Незаконный билет на разворот в Грузии

Главная »Нарушения вождения» Незаконный разворот в Грузии

Стремясь защитить своих автомобилистов, штат Джорджия принял особенно строгий набор законов, касающихся того, как водители транспортных средств должны совершать развороты.Этот закон разработан, чтобы уменьшить большое количество несчастных случаев, которые происходят каждый год в штате Джорджия с участием водителей транспортных средств, которые совершили неправильные развороты.

Понимание применимого законодательства и основных деталей о разворотах в штате Джорджия — это один из способов подготовки водителей транспортных средств к обвинению в таком правонарушении. Второй отличный подготовительный шаг — понять, что быстрое удержание юрисконсульта из Yeargan & Kert, LLC после обвинения в незаконном развороте на 180 градусов также часто является отличной идеей.

Как правильно выполнить разворот
Все водители автотранспортных средств в штате Джорджия должны понимать, как правильно выполнять разворот. Законный разворот требует следующих шагов:
Посмотрите. Перед разворотом водители транспортных средств должны убедиться, что рассматриваемый путь свободен, в том числе убедиться, что приближающиеся транспортные средства находятся на расстоянии более двухсот футов и что пешеходный переход свободен.
Сигнал. Водители транспортных средств должны включить левый сигнал, чтобы уведомить других людей в районе, что водитель планирует повернуть налево.
Продолжить. Водители транспортных средств должны двигаться вперед, не отпуская стопы от тормозов.
Держитесь правой стороны переулка. Водители транспортных средств должны следить за тем, чтобы транспортное средство оставалось на правой стороне полосы движения, готовясь к повороту влево.
Поверните рулевое колесо. После того, как медиана удалена, водители автомобилей должны повернуть рулевое колесо как можно дальше влево.
Разгон. При выходе из разворота водители автомобилей должны начать немного ускоряться.
Возобновить нормальную скорость. Как только водитель автомобиля полностью завершит поворот, он должен вернуться к нормальной скорости.
Применимые законы, касающиеся разворотов
Поскольку разворот является одним из самых сложных способов вождения, которые может выполнять водитель транспортного средства, всем водителям транспортных средств важно понимать, какую осторожность требуется в такой ситуации.
Закон штата Джорджия требует, чтобы водители транспортных средств совершали развороты на любом повороте или участке дороги, который приближается к гребню холма или проходит рядом с ним. Развороты на холмах особенно опасны, потому что другие транспортные средства, движущиеся за поворотом или холмом, не могут видеть приближающееся транспортное средство.
Также в соответствии с законом штата Джорджия, водителю автотранспортного средства не разрешается совершать разворот, если поворот не может быть выполнен безопасно или не мешает приближающимся транспортным средствам.
разворотов в штате Джорджия также запрещены в Грузии на всех участках дорог или автомагистралей, на которых размещен знак, запрещающий данное действие.
В дополнение к указанным знакам, указывающим на разворот, водители транспортных средств должны также проверять наличие встречного транспорта и пешеходов. Эти законы, касающиеся разворотов, были приняты как для защиты водителей автомобилей, так и для защиты всех других лиц, путешествующих по дороге.
Защита от неправомерного разворота от компании Yeargan & Kert, LLC
Защита аварий на разворотах часто связана с утверждением, что правоохранительные органы недостаточно установили, что человек совершил неправильный поворот, и, таким образом, водитель не нарушал закон.Другие успешные меры защиты включают аргументы в пользу того, что адвокат противной стороны не представил адекватных свидетельских показаний или данных наблюдения, чтобы продемонстрировать, что рассматриваемый несчастный случай произошел.
Некоторые дополнительные потенциальные средства защиты, которые могут оспаривать отдельные лица, включают аргументы о том, что: автомобиль водителя был остановлен ненадлежащим образом, водитель не управлял транспортным средством, которое совершило незаконный разворот, о котором идет речь, водитель транспортного средства не знал, что развороты не выполнялись. разрешено в этой обозначенной зоне, или чтобы человек сделал разворот в аварийных целях, например, при возникновении проблемы с автомобилем.
Если водитель автомобиля сделал разворот, чтобы избежать столкновения с другим транспортным средством, судья, вероятно, учтет этот аспект при вынесении приговора.
Существуют некоторые меры защиты, которые не будут приняты в ответ на неправильные обвинения в развороте, в том числе следующее: управляемое транспортное средство ошибалось в отношении того, разрешен ли разворот в определенной области, аргументируя это тем, что в аварии никто не пострадал, или полагаясь на сочувственную историю.
Лучший способ избежать обвинительного приговора за незаконный разворот — это вообще избежать цитирования. Людям следует избегать разворота в определенных местах, в том числе: на перекрестке со светофором, в середине квартала в городских или жилых районах, где размещен знак, строго запрещающий разворот, где видимость даже частично ограничено, или где-либо, где правоохранительные органы находятся в пределах видимости.
Последствия обвинения в незаконном развороте на 180 градусов
Существует несколько существенных штрафов, которые могут возникнуть в связи с обвинением в совершении незаконного разворота.Спортсмены получают три очка в личном зачете. Накопление более пятнадцати баллов на водительских правах физического лица в течение двадцати четырех месяцев приведет к приостановлению действия водительских прав.
Обвинение в незаконном развороте также может привести к значительному увеличению страховых тарифов. С физических лиц также могут взиматься несколько сотен долларов за получение водительских прав. Это просто штрафы, которые могут возникнуть из-за неправильного поворота на разворот.Физические лица также могут нести гражданскую ответственность, если их действия привели к дорожно-транспортным происшествиям.
Обратитесь к квалифицированному адвокату по несчастным случаям в компании Yeargan & Kert, LLC
Во многих случаях юрисконсульту противной стороны сложно установить, что лицо несет ответственность за любой ущерб, травмы или смертельные случаи, возникшие в результате ненадлежащего дорожно-транспортного происшествия. Квалифицированный юрисконсульт, такой как команда Yeargan & Kert, LLC, может помочь подготовить убедительное дело, чтобы клиенты могли получить адекватную компенсацию за ущерб.
Наша юридическая фирма занимается активной защитой наших клиентов в случаях дорожно-транспортных происшествий, включая ситуации, связанные с неправильным разворотом. Свяжитесь с Yeargan & Kert, LLC сегодня, чтобы разработать надежную юридическую стратегию, чтобы вы могли убедиться, что ваше дело разрешится наилучшим образом.
Британский разворот во время путешествия застал многих британских отдыхающих врасплох | Путешествие
Всего несколько месяцев назад Британии завидовали европейцы. Стремительная вакцинация открыла путь к открытию Великобритании.экономия, от магазинов до ресторанов и до международных поездок. Европейский союз, напротив, выглядел застрявшим в бюрократии прививок и бесконечных блокировках Covid-19.
Теперь ситуация меняется, и правительство премьер-министра Бориса Джонсона заняло оборонительную позицию после внезапного разворота политики в отношении путешествий, который застал многих британских отдыхающих врасплох. По другую сторону канала, количество бронирований на время отпуска из Германии во Францию и в Испанию набирает обороты в соответствии с кампанией вакцинации, охватывающей растущую часть населения и подавляющей число инфекций.
Неожиданное решение Великобритании от 3 июня исключить Португалию из небольшого списка стран, путешествовать по которым было относительно легко, вынудило туристов искать убежища или столкнуться с длительными карантинами и дополнительными тестами при повторном въезде.
Этот резкий шаг перекликается с потрясениями, которые произошли прошлым летом, когда внезапные изменения правил карантина вынудили отдыхающих срочно спешить домой. Это вынудило авиакомпании снова перестроиться после вливания дополнительных ресурсов на португальский рынок, когда эта страна открылась несколько недель назад.
«Правительство Бориса Джонсона снова плохо управляет восстановлением Covid», — сказал Майкл О’Лири, главный исполнительный директор специалиста по скидкам Ryanair Holdings Plc. «Такой подход к путешествиям на короткие расстояния по Европе необъясним и неоправдан, когда 75% населения Великобритании уже получили вакцину против Covid».
Для британцев, застрявших в Португалии, перевозчики вводят дополнительные рейсы, чтобы помочь им вернуться домой. И British Airways, и EasyJet заявили, что они будут выполнять больше рейсов и использовать более крупные самолеты, чтобы пассажиры могли вернуться в U.К. до крайнего срока вторника.
Устойчивый прирост
В то время как последний поворот наверняка удержит многих британцев от планирования отпуска за границей, количество бронирований пляжного отдыха из Германии, Италии, Испании и Франции неуклонно растет, и за последний месяц оно выросло примерно на 52%. , согласно сайту сравнения путешествий Skyscanner. Популярные направления включают Пальму, Ибицу, Барселону, Тенерифе и Крит.
На этой неделе Франция заявила, что с 9 июня разрешит въезд вакцинированным путешественникам из ЕС без отрицательных тестов на Covid-19.Все государства-члены будут принимать посетителей, которые имеют так называемые сертификаты Covid-19 с 1 июля. Он будет выдан бесплатно в цифровом или бумажном формате, получивший название Европейского сертификата Covid. вылечились от болезни или дали отрицательный результат.
Фирма TUI AG предлагает скидки до 52% на поездки в последнюю минуту на Майорку и Канарские острова, в то время как британский дисконтный перевозчик EasyJet Plc заявила, что будет наращивать свой европейский флот, несмотря на постоянно меняющиеся правила внутренний рынок делает невозможным планирование.
Страны ЕС уже имеют право начать допускать посетителей из-за пределов блока, включая важнейший американский контингент. По данным министерства здравоохранения, Италия была одной из первых европейских стран, которые открылись вновь, что позволило пассажирам из стран ЕС, Великобритании и Израиля пропустить карантин, если у них был отрицательный тест на Covid. Греция с ее экономикой, зависящей от туризма, с апреля допускает туристов из некоторых стран без карантина.
В мае TUI, привлекающая клиентов из Германии и Великобритании, заявила, что придерживается своих планов по предоставлению 75% своих мощностей 2019 года в пиковые месяцы с июля по сентябрь.Даже после того, как Великобритания исключила Испанию из зеленого списка, немцы уже могут отдыхать в стране после снятия общего запрета на поездки, и круизы TUI Cruises возобновили свою деятельность.
Air France-KLM и Deutsche Lufthansa AG прогнозируют улучшение ситуации в течение лета. Air France-KLM заявила, что ее групповая пропускная способность в течение сезона составит 65% от уровня 2019 года, в то время как Lufthansa добавила европейские направления и увидела, что количество бронирований на некоторых маршрутах в Испанию превысило уровень 2019 года.
Ослабление пограничных ограничений французскими властями распространяется на вакцинированных посетителей из ЕС и отменяет требования карантина для привитых британских и американских прибывающих.
«Это отличная новость, которая позволит французам поехать в отпуск и увидеть своих родственников, а некоторым туристам — посетить нашу страну», — написала в Твиттере генеральный директор Air France Анн Ригейл после объявления в пятницу.
Приоритеты Великобритании
Великобритания хочет отменить внутренние ограничения на коронавирус 21 июня, но число случаев заболевания Covid снова растет, чему способствует высоконаселенная версия Delta, впервые выявленная в Индии, которая сейчас доминирует в Великобритании. Для Джонсона, который сам переживал коронавирус, его решение сводится к уравновешиванию пандемии, нанесенной промышленности, психическому здоровью людей и возможностям трудоустройства, с риском нового всплеска числа случаев заболевания.
Руководители в Великобритании ясно дали понять, на чьей стороне они. Разъяренные боссы авиакомпаний написали правительству, требуя ответов о методологии переезда Португалии, не добавляя при этом больше стран в список.
«Это решение стало шоком и серьезным ударом для авиационной промышленности Великобритании и путешествующей публики», — говорится в письме от 4 июня, адресованном министру транспорта Гранту Шаппсу. «Решения о распределении по стране остаются туманными, что делает невозможным планирование для авиакомпаний и наших клиентов.”
Следите за другими историями на Facebook и Twitter
Эта история была опубликована из ленты информационного агентства без изменений в тексте. Изменился только заголовок.
Emotion 3 — Парапланы — Продукция
LTF / EN A
XS 23 / S 25,5 / SM 28,5 / M 30 / L 31,5 / XL 35
Безопасность в новом поколении
EMOTION 3 устанавливает новые стандарты в области безопасности и производительности.Никогда раньше не прилагалось таких огромных усилий, чтобы выйти на новый уровень развития. Испытания и строительные работы над новым элитным А-крылом длились более года. Многие исследования и прототипы были созданы, отброшены и оптимизированы в ходе бесчисленных испытательных полетов.
Требования к новому поколению установленной серии EMOTION были очень высокими, тем не менее, все ожидания были превзойдены с новой концепцией крыла. U-Turn делает ставку на планеры подходящего класса, поэтому при разработке нового крыла класса А все было поставлено под девизом бескомпромиссной пассивной безопасности.
EMOTION 3 сочетает в себе спортивные качества с очень высокой переносимостью. Особенно в турбулентном воздухе непросто взъерошить крыло — в любом случае необходима компенсация давления, реакции получаются очень умеренными и затухающими. Высокая стабильность поддерживает потрясающие характеристики планирования и подъема EMOTION 3. Даже в слабом термике крыло поднимается очень эффективно и динамично превращается в кривые, что особенно заметно при центрировании в термике.
В EMOTION 3 особое внимание было уделено надежному запуску. Крыло поднимается ровно и без тенденции крена купола вперед. Он быстро наполняется даже при небольшом ветре и с небольшими усилиями.
EMOTION 3 — идеальное крыло для новичков, которое обещает безопасное развлечение даже после школы. Крыло предназначено для всех пилотов, которые ищут элитное крыло A-класса новейшего поколения.
.